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PCR实验分区知多少

幸福的人都是一样的,不幸福的人各有各的不同,隔壁师兄做出来的定量PCR曲线不仅完美,重复性也好,而我的实验却一言难尽,该出峰的曲线不理想,不该出峰的却都是峰,我能怎么办,我也很绝望啊,核酸气溶胶的污染悄无声息,防不胜防,假阳性的结果让做PCR的我崩溃抓狂……

是否有好的方法来进行应对呢?我苦思冥想……

那我们先来了解一下什么是气溶胶?

气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,在气体与液体面摩擦时,操作时比较剧烈地摇动反应管,离心机离心,扩增后PCR产物开盖时、吸样时及移液器枪反复吹吸样品时都可形成气溶胶而污染。


综上所述,为了得到好的实验结果,PCR反应需要进行严格的实验分区:

☑   常规需要设置3个独立的分区:试剂耗材储存与准备区、样品处理和样品制备区,扩增检测区,各区域空间完全独立;实验室实施空气流向控制,扩增前和扩增后区域应具有独立的通风系统,扩增后区域保持负压状态,其他区域保持常压,防止扩增产物进入扩增前的区域。

理想情况下需要四个独立分区:严格按照单一流向进行实验,即试剂准备区(1区)—样本制备区(2区)—扩增分析区(3区),严禁逆流,实验室内温度为15°C-30°C为合格范围等。

☑   除此之外,还要物品专用:各区域只用于特定操作,不得从事其他工作,例如试剂,工作服,仪器,手套,标记笔等等均为该区专用,不得交叉使用。

☑     使用完的枪头,废液等,需要在专区进行处理。


小编今天就总结到这了,还要继续我的PCR实验去了!