PCR耗材选择的Q&A

导读

俗话说的好，工欲善其事，必先利其器。耗材的选择对得到满意的PCR实验结果至关重要。在分析PCR结果时，我们往往侧重于对引物、酶的浓度、温度和时间的分析，却忽略了PCR耗材也是影响因素之一。PCR耗材类型众多，如何选择合适的PCR耗材呢？下面几个问题可以帮你找到答案。

1、PCR耗材为什么一般都是PP材质？

不管是普通的PCR还是实时荧光定量PCR（qPCR），通常其耗材会与试剂或样品直接接触，因而在生产制备过程中要求选用高质量的材料和良好的加工工艺。一般耗材都是选择聚丙烯（PP）材质。聚丙烯（PP）材质是生物学惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有着良好的化学耐性，及温度耐受性。

2、不同体积的PCR管/板，该怎么选？

PCR 管/板常见的体积：

• 单管/8连管/12连管：0.5mL、0.2mL、0.1mL

• 96孔板：0.2mL、0.1mL

• 384孔板：0.02mL

PCR 管/板的规格：

依据具体的实验要求选用合适的产品。PCR 管的体积大多数都可以满足 PCR 反应的要求。容量规格有标准容量和低容量可选，一般情况下推荐优先选用低容管。因为低容反应管/板有着较小的上方空间，可提高热传导率并降低蒸发。同时，在加样时需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降，溢出及交叉污染，而过少可能会造成样品蒸发损失。

3、单管或8联管的平盖/凸盖有什么区别?

当样品量较少时，都会优先选用单管或者8联管。但是当反应体积需求较大时，单管占优势，体积可达 0.5 mL。单管和8联管有平盖和凸盖两种，各有优点。平盖可为qPCR提供精确的荧光信号传递；便于书写标记。凸盖与PCR仪盖接触，减少压力引起的管变形等；但会影响荧光信号传递，无法应用于qPCR实验。

4、不同的96孔板使用场景有什么不同？

96孔板一般分为无裙边板、半裙边板和全裙边板。

无裙边板：可适用于大多数的 PCR 仪或 qPCR 仪，但不适用于自动化应用。移液过程中稳定性不高，需要配合板托使用。

半裙边板：可适配标签或应用条码，及自动化应用，且有着较好的移液稳定性。

全裙边板：非常适用于自动化实验应用，也可适配标签及应用条码。机械强度较好，可适用于凸出模块的 PCR 仪，且移液过程中稳定性高。

5、PCR板/管材质是厚点的稳定性更好吗？

不是的。PCR耗材的管壁厚度要均一，才能提供一致的热传导。超薄管壁较标准版薄50%，可进一步减少热屏障，带来更快更好的反应效果。

6、对于 96 孔或者 384 孔板，为什么切角和标识都不是很相同呢？

切角：PCR 板的切角位置选择取决于适配仪器要求，便于定位。

标识：PCR 板的数字字母标记有助于识别单个孔及样品位置。一般为凸出的颜色数字标识或者印刻标识。对于一些自动化应用实验，印刻标记的反应板密封性会更好。

7、有的PCR 板孔是凸出的，有的却是平的呢，哪个更好？

适合的才是最好的。常见的 PCR 板有平孔缘和加高孔缘两种。平孔缘的反应板，可适用于大多数的 PCR 仪。升孔缘的反应板，便于封膜，可降低样品间的交叉污染风险。

8、不同颜色的PCR管/板，该怎么选？

对于普通的PCR反应选用透明的就可以。在实时PCR反应时，白管的灵敏度和一致性相对更高。白色管壁能够阻止荧光穿过管壁和折射，进而防止荧光传至加热模块，被模块吸收或发生不一致反射等情况。相比于透明管，在白管的顶端能够采集到更强，更聚焦的荧光信号。